超声波辅助提取大新苦丁茶中总黄酮

广西崇左市大新县 2003 年被授予“中国苦丁茶之乡”称号，原国家质检总局 2006 年正式批准对“大新苦丁茶”实施地理标志产品保护。目前大新县大面积推广种植的苦丁茶其种名系为 Ilex Kudingcha C.J.Tseng，喜高温多湿而不耐寒，若引至江浙一带栽培冬季会冻死，但是口感比大叶冬青好。近年来的科学研究表明：苦丁茶可以预防和干预高脂饮食引起的高脂血症、保护肝损伤和胃损伤、降低胆固醇、保护心脏神经和皮肤，具有抗衰老、减肥等作用，因此常被用作制成辅助治疗的功能性饮料，备受人们青睐。苦丁茶中含有的黄酮类物质是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有多种生物活性功能，如抗氧化、抗菌、抗炎等。提取苦丁茶中总黄酮的方法有热水提取法、乙醇回流法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法等，不同的提取方法各有优点，都被广泛地应用在总黄酮的提取过程中。其中，超声波辅助提取的原理主要是利用超声波在液体中的空化作用加速被提取成分和溶剂的相互扩散，从而加速植物有效成分的浸出提取，因此应用比较广泛。

材料和方法

材料、试剂及仪器

材料与试剂

 新鲜苦丁茶嫩叶：采集于广西大新县龙门乡；芦丁对照品：上海如吉生物科技发展有限公司；95%乙醇：天津市北联精细化学品开发有限公司；硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠：成都市科龙化工试剂厂。以上试剂均为分析纯。

仪器

CLF-02 型封闭粉碎机：中国浙江温岭市创力药材器械厂；722 型可见光分光光度计：上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限公司；KQ5200E 型超声波清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；AR124CN 电子天平：奥豪斯仪器有限公司制造；Φ300 国家标准筛：新乡市大汉振动机械有限公司。

试验方法

苦丁茶原材料预处理

 将采摘到的苦丁茶树叶清洗干净，用剪刀剪成碎片，放入鼓风干燥箱中，60 ℃烘干，置于高速粉碎机中粉碎，得到苦丁茶粉末，过 60 目筛，用塑料袋密封包装好，放入装有蓝色硅胶的干燥器中备用。

总黄酮的定性检验

 Fe3+反应：取苦丁茶提取液 2.0 mL 于试管中，加1 滴 FeCl3 溶液反应，振荡。当提取液表现出墨绿色，则证实其中含有黄酮。

 HCl-Zn 反应：取苦丁茶提取液 2.0 mL 于试管中，先添加少量锌粉，接着加 4 滴浓盐酸进行反应，振荡。当提取液表现出亮黄色，则证实其中含有黄酮。3）NaOH 反应：取苦丁茶提取液 2.0 mL 于试管中，加 4 滴 4%的 NaOH 进行反应，振荡。当提取液表现出橙红色，则证实其中含有黄酮[14]。4）A（l NO3）4 反应：取苦丁茶提取液 2.0 mL 于试管中，加 4 滴 10%的 Al（NO3）3 溶液，振荡。当提取液呈黄色，则证实其中含有黄酮。

标准曲线的绘制

 标准溶液的配制：精准称取 40.0 mg 芦丁标准品于 100 mL 烧杯中，加入适量 60%的乙醇溶液溶解，待完全溶解后移入 100 mL 容量瓶中，再用 60%乙醇溶液定容至刻线，摇匀，得到质量浓度为 400 μg/mL 的芦丁标准使用液